菌種的制備是指將保存的菌種進(jìn)行活化，再經(jīng)搖瓶或種子罐等逐級(jí)擴(kuò)大的過程。種子擴(kuò)大培養(yǎng)增加菌體的數(shù)量，滿足工業(yè)化生產(chǎn)對(duì)大量菌種的需求。菌體達(dá)到一定濃度不僅是高效率和高質(zhì)量生產(chǎn)的保證，而且是縮短發(fā)酵周期、降低生產(chǎn)成本的必然要求。種子擴(kuò)大培養(yǎng)可以提升種子生產(chǎn)性能。首先，通過營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的充分供應(yīng)和適宜環(huán)境的控制，可激發(fā)菌體的新陳代謝活力，讓菌體生長(zhǎng)代謝旺盛；其次，在擴(kuò)大培養(yǎng)過程中通過調(diào)節(jié)培養(yǎng)基組成、發(fā)酵溫度、pH等因素逐步向生產(chǎn)階段的真實(shí)環(huán)境逼近，調(diào)理菌體的代謝，讓菌體在快速增殖的同時(shí)使菌體的各項(xiàng)生理性能向最適宜生產(chǎn)需要的方向趨近。菌種經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)后，以優(yōu)勢(shì)菌進(jìn)行生產(chǎn)，可以減小雜菌污染概率，減少“倒罐”現(xiàn)象，這是成功生產(chǎn)的保障。

菌種是從事微生物學(xué)及生命科學(xué)研究的基本資料，因此，菌種保藏是一項(xiàng)重要的基礎(chǔ)性工作。菌種保藏主要是根據(jù)微生物的生理生化特點(diǎn)，人工創(chuàng)造條件，使孢子或菌體的生長(zhǎng)代謝活動(dòng)盡量降低，以減少其變異。

需要的器材與試劑

1.器材

恒溫培養(yǎng)箱，恒溫?fù)u床，250mL錐形瓶，無菌移液器，接種環(huán)，無菌甘油，無菌離心管（5mL）等。

2.試劑

菌種：酵母（Candida sp.）。

培養(yǎng)基：葡萄糖20.0g/L，酵母膏6.0g/L，磷酸二氫鉀5.0g/L，硫酸鎂0.25g/L，pH 5；固體培養(yǎng)基另加瓊脂20g/L。

菌種的培養(yǎng)和保藏

1.菌種的活化

將冰箱保藏的斜面菌種用接種環(huán)轉(zhuǎn)接入新鮮的斜面培養(yǎng)基后，28℃恒溫培養(yǎng)48h。如果冰箱保藏菌種活力較低，可以重復(fù)上述操作進(jìn)行多次傳代培養(yǎng)，以恢復(fù)菌種的活力。

2.菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)

將活化好的酵母菌轉(zhuǎn)接入裝有液體培養(yǎng)基的錐形瓶中，250mL錐形瓶中的裝液量為30～50mL，接種量為一環(huán)；在恒溫?fù)u床里28℃恒溫振蕩培養(yǎng)48h，搖床轉(zhuǎn)速為170～200r/min。

3.菌種的保藏

（1）斜面保藏　將恢復(fù)生長(zhǎng)活力的斜面菌種放入冰箱中進(jìn)行低溫保藏。要求在30天左右進(jìn)行傳代復(fù)活培養(yǎng)。

（2）甘油保藏　用無菌移液器取2mL生長(zhǎng)良好的發(fā)酵液，于超凈工作臺(tái)上轉(zhuǎn)入無菌離心管中，然后加入1mL無菌甘油，蓋緊頂蓋后于振動(dòng)器上將甘油和發(fā)酵液混合均勻。迅速置于-70℃冷凍保藏